技术中心
technology
CENTER

人输尿管上皮永生化细胞的处理方法与培养步骤!

2022-12-07作者:百欧博伟生物浏览次数:30  来源:北京百欧博伟生物技术有限公司

                                  人输尿管上皮永生化细胞的处理方法与培养步骤!



一、细胞简介

平台编号:bio-73163

拉丁属名:SV-HUC-1

细胞名称: SV-HUC-1(人输尿管上皮永生化细胞)

种属:人

年龄(性别):男;11岁

组织来源:输尿管,输尿管上皮

生长特性:贴壁

细胞形态:上皮细胞样

背景描述:SV-HUC-1细胞是正常输尿管组织用SV40病毒转染建株的。反复用非洲绿猴肾细胞平板测试检测传染性SV40的生成,结果都呈阴性;SV-HUC-1细胞在胁迫(如曝露于化学试剂)下可能激活病毒。

生长培养基:Ham's F-12K(货号:PM150910)+10% FBS(货号:164210-500)+1% P/S(货号:PB180120)

培养条件:气相:空气,95%;CO2,5% 温度:37℃

注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用


二、细胞接受后的处理方法

1)收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。

2)请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

3)弃去T25瓶中的培养基,添加6ml新的的完全培养基。

4)如果细胞长满(90%以上)请及时进行细胞传代。

5)接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。


三、细胞培养操作规程,供参考

1、培养基及培养冻存条件准备:

1)准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。

2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。

3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。

2、细胞处理:

1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。


四、注意事项

1、收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。

2、收到细胞先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时(视细胞密度而定)稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时就整体外观拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,随后在显微镜下拍下细胞状态,100*,200*各一张),观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。

3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响,故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态,故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明,期间间隔时间不能大于7天。

4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。


五、细胞培养方法

1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;

②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;

③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;

⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏:

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。

3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)

②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;

④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。


微生物菌种查询网自设细胞系板块,是细胞株提供中心,专业提供代次低、周期短、活性好的细胞株。与国内外多家研制单位,生物医药,第三方检测机构,科研院所有着良好稳定的长期合作关系!欢迎广大客户来询!

征稿、访谈、专题合作邮件:
tougao@instrumentsinfo.com
版权与免责声明:
凡本网注明“来源:仪器设备网”的所有作品,版权均属于山东新路领航信息技术有限公司-中国仪器设备网合法拥有版权或有权使用的作品,未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。 已经本网授权使用作品的,应在授权范围内使用,并注明“来源:中国仪器设备网,http://www.instrumentsinfo.com”,违反上述声明者,本网将追究相关法律责任。 本网转载并注明自其它来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。 如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起一周内与本网联系,我们将及时作出删除或修改,否则视为放弃相关权利。
转载本站原创文章请注明来源:仪器设备网
推荐展会
2023上海工业自动化展览会7月
时间:2023年07月26日-29日
主办:中国设备管理协会
地点:
2023中国润滑油展览会6月上海
时间:2023年06月08日-10日
主办:中石化润滑油有限公司 中石油润滑油公司 中国贸促会上海市分会
地点:
Antioxidants期刊首届国内线上研讨会开讲啦!
时间:2022年06月16日-16日
主办:Antioxidants
地点:
2022中国深圳新能源锂电池技术展览会.暨锂电池行业交流论坛
时间:2022年12月07日-09日
主办:新能源锂电池技术展览会组委会
地点: 上海市奉贤区奉金路469号2幢2333室
扫码登陆 仪器设备网手机版
微信公众号