技术中心
technology
CENTER

人皮肤癌细胞的培养步骤与注意事项!

2021-05-27作者:百欧博伟浏览次数:271  来源:北京百欧博伟生物技术有限公司

人皮肤癌细胞培养步骤与注意事项!


一、细胞简介

平台编号:bio-105919

规格:1ml/T75

拉丁属名:A2058(人黑色素瘤细胞)

细胞名称:人黑色素瘤细胞

编号:AH5008

细胞数:1×10^6

细胞用途:仅供科研使用。

注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用。


二、细胞特性

1)来源:人

2)形态:上皮细胞

3)含量:>1x106 个/mL

4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5)规格:T75瓶或者1mL冻存管包装


三、细胞的运输和保存

使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后,可在1000RPM,常温条件下,离心5min后,于洁净操作台弃去上清,加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T75培养瓶中培养,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。


四、细胞培养步骤

1、培养基及培养冻存条件准备:

1)培养液:DMEM+10%FBS

2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

3)冻存液:90%FBS+10%DMSO,现用现配。液氮储存。

2、细胞处理:

1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml FBS后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。


对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2、加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3、按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。

4、将细胞悬液按1:6-1:12的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。


五、注意事项

1、收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。

2、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。



北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!


征稿、访谈、专题合作邮件:
tougao@instrumentsinfo.com
版权与免责声明:
凡本网注明“来源:仪器设备网”的所有作品,版权均属于山东新路领航信息技术有限公司-中国仪器设备网合法拥有版权或有权使用的作品,未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。 已经本网授权使用作品的,应在授权范围内使用,并注明“来源:中国仪器设备网,http://www.instrumentsinfo.com”,违反上述声明者,本网将追究相关法律责任。 本网转载并注明自其它来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。 如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起一周内与本网联系,我们将及时作出删除或修改,否则视为放弃相关权利。
转载本站原创文章请注明来源:仪器设备网
推荐展会
2021综合能源服务产业暨电力用户侧技术发展高峰论坛
时间:2021年06月17日-18日
主办:
地点:
2021第10届华中科学仪器与实验室装备展览会
时间:2021年10月14日-16日
主办:武汉东湖国家自主创新示范区生物医药行业协会
地点:
2021国际检验医学精准诊疗大会暨2021国际检验医学暨体外诊断试剂展览会
时间:2021年12月25日-27日
主办:中国肿瘤防治联盟
地点: 广州市科丰路89号萝岗万达广场写字楼B1栋2304室
扫码登陆 仪器设备网手机版
微信公众号