技术中心
technology
CENTER

人主动脉血管平滑肌细胞的处理方法与培养步骤!

2021-05-07作者:百欧博伟浏览次数:244  来源:北京百欧博伟生物技术有限公司

人主动脉血管平滑肌细胞的处理方法与培养步骤!


一、细胞简介

平台编号:bio-73458

规格:冷冻管

拉丁属名:HA-VSMC

细胞名称:HA-VSMC(人主动脉血管平滑肌细胞)

种属:人

年龄(性别):11月龄

组织来源:主动脉

生长特性:贴壁

细胞形态:成纤维细胞样

细胞用途:仅供科研使用。

注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用。


二、细胞特性

1)来源:人;主动脉血管;平滑肌细胞

2)形态:成纤维细胞样;贴壁生长

3)含量:>1x106 个/mL

4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5)规格:T25 瓶

6)培养基:DMEM/F12 90% + FBS 10% + 1% 双抗。

7)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37 摄氏度,培养箱湿度为 70%-80%。

8)冻存液:90% 完全培养基,10% DMSO,现用现配,液氮储存。

9)注意事项:拿到细胞后,一定要首先给细胞拍照,严格按照细胞操作说明书进行操作,在刚开始拿到细胞后的 1 周内,每次传代一定要注意拍照。


三、细胞的运输和保存

使用含有优质胎牛血清的 2ml 冻存管发送存活细胞。收到细胞后,可在 1000RPM,常温条件下,离心 5min 后,于洁净操作台弃去上清,加入推荐使用的培养基后转移至 10 cm 培养皿或者 T25 培养瓶中培养,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。


四、细胞接受后的处理方法

1)收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。

2)请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将 T25 瓶置于 37℃培养约 2-4 h,让细胞适应稳定下新环境。

3)请将培养瓶里的培养液吸取到 2 个 50 ml 离心管中,1000 rpm 离心 5 分钟,收集悬浮的细胞。原瓶中留取 5-10 ml 培养基,用于细胞的继续培养。收集的悬浮细胞可以置于新的细胞培养瓶中继续培养。

4)如果细胞长满(90%以上)请及时进行细胞传代,传代时请使用新鲜培养基逐步替代瓶中自带的培养基。培养瓶中留一部分原装培养液,再补加自己新配的培养基至适当容积,例如 4-10 ml,让细胞逐步适应新的培养基环境。

5)接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。如果细胞发生污染,或者细胞无法传代成功,请务必在7日内给予反馈!


五、细胞培养步骤

细胞处理:

1)复苏细胞:将含有 1 ml 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4 mL 培养基混合均匀。在 1000 RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补加 1-2 mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入 10 cm 皿中,加入约 8 ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。

1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2、加 1ml 消化液(0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3、按 6-8 ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000 RPM 条件下离心4 分钟,弃去上清液,补加 1-2 mL 培养液后吹匀。

4、将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8 ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;

1、细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆脱落后,加入 1 ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。

2、4 min 1000 rpm 离心去掉上清。加 1 ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1 ml 细胞悬液,注意冻存管做好标识。

3、将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。


六、注意事项

1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。

2、仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。

3、用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落,将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力,如果证实细胞活力正常,请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活力,请拍下 照片及时和我们联系,信息确认后我们为您再免费寄送一次。

4、静置细胞贴壁后,请将细胞瓶内的培养基倒出,留 6~8mL 维持细胞正常培养,待细胞汇合度 80%左右时正常传代。

5、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用,细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件。

6、建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和Procell 技术部沟通交流。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7、该细胞仅供科研使用。


征稿、访谈、专题合作邮件:
tougao@instrumentsinfo.com
版权与免责声明:
凡本网注明“来源:仪器设备网”的所有作品,版权均属于山东新路领航信息技术有限公司-中国仪器设备网合法拥有版权或有权使用的作品,未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。 已经本网授权使用作品的,应在授权范围内使用,并注明“来源:中国仪器设备网,http://www.instrumentsinfo.com”,违反上述声明者,本网将追究相关法律责任。 本网转载并注明自其它来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。 如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起一周内与本网联系,我们将及时作出删除或修改,否则视为放弃相关权利。
转载本站原创文章请注明来源:仪器设备网
推荐展会
2021综合能源服务产业暨电力用户侧技术发展高峰论坛
时间:2021年06月17日-18日
主办:
地点:
2021第10届华中科学仪器与实验室装备展览会
时间:2021年10月14日-16日
主办:武汉东湖国家自主创新示范区生物医药行业协会
地点:
2021国际检验医学精准诊疗大会暨2021国际检验医学暨体外诊断试剂展览会
时间:2021年12月25日-27日
主办:中国肿瘤防治联盟
地点: 广州市科丰路89号萝岗万达广场写字楼B1栋2304室
扫码登陆 仪器设备网手机版
微信公众号