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小鼠胚胎细胞传代方法与注意事项!

2021-04-30作者:百欧博伟浏览次数:204  来源:北京百欧博伟生物技术有限公司

小鼠胚胎细胞传代方法与注意事项!


一、细胞简介

平台编号:bio-73112

规格:1×10⁶cells/T25培养瓶

拉丁属名:NIH/3T3

细胞名称: NIH/3T3(小鼠胚胎细胞)

种属:小鼠

年龄(性别):胚胎

组织来源:胚胎

生长特性:贴壁

细胞形态:成纤维细胞样

背景描述:NIH/3T3细胞是从NIH Swiss小鼠胚胎培养物中建立的高度接触性抑制的连续传代细胞株。为了培育在形态学特征上更适合于进行转化分析的亚株,建立的NIH/3T3细胞株又进行了5轮以上亚克隆。NIH/3T3细胞对肉瘤病毒的转化灶形成和白血病病毒的繁殖高度敏感,对DNA转化及转染研究十分有用;NIH/3T3细胞鼠痘病毒阴性。

生长培养基:DMEM高糖(货号:PM150210)+10% CS+1% P/S(货号:PB180120)

培养条件:气相:空气,95%;CO2,5% 温度:37℃

注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用


二、细胞描述

与原始的随机交配3T3和近交系BALB/c  3T3建株方法一样,NIH/3T3,是从NIH Swiss小鼠胚胎培养物中建立的高度接触抑制的连续细胞株。为了培育在形态学特征上更适合于进行转化分析的亚株,建立的NIH/3T3细胞株又进行了五轮以上亚克隆。这株细胞对DNA转化及转染研究十分有用。检测表明肢骨发育畸形病毒(鼠痘)阴性。


三、培养条件

完全培养基:90%DMEM培养液(内含2mM L-glutamine)+10%胎牛血清

培养条件:37.0Ccarbon dioxide(CO2),5%


四、传代方法

收到细胞后,在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况:

如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,换 10ml新鲜培养液后继续培养。

如果细胞已长满(达80-90%),即可进行传代培养。具体步骤如下:

1、弃去培养液,用不含钙、镁离子的PBS洗1-2次。

2、加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,倒转放于37℃培养箱1-3分钟预热,然后将培养瓶翻过来让胰酶与细胞面接触大约10-30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3、按6-8ml/瓶补加完全培养基,轻轻打匀后吸出一半,分到新的培养瓶中。如果没有特别说明,收到细胞后的di yi次传代一般是一传三。

注:1、观察细胞zui hao在低倍镜(4或5X物镜)下进行,否则不能准确判断细胞的传代密度。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基,细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢,如发现贴壁细胞有脱落,可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请及时与我们联系。


五、冻存方法

冻存液:90%完全培养液,10%DMSO.现用现配

储存:液氮储存


六、注意事项

1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。

2、仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。

3、用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落,将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力,如果证实细胞活力正常,请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活力,请拍下照片及时和我们联系,信息确认后我们为您再免费寄送一次。

4、静置细胞贴壁后,请将细胞瓶内的培养基倒出,留 6~8mL 维持细胞正常培养,待细胞汇合度 80%左右时正常传代。

5、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用,细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件。

6、建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和中国微生物菌种查询网技术部沟通交流。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回直至问题解决。

7、该细胞只可用于科研。


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