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人脐带间充质干细胞的复苏和培养!

2021-04-14作者:百欧博伟浏览次数:332  来源:北京百欧博伟生物技术有限公司

人脐带间充质干细胞的复苏和培养!


一、基本信息

平台编号:bio-108930

拉丁属名:HUMSC

细胞名称:人脐带间充质干细胞

规格:5*10e5

注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用


二、细胞特性

1) 细胞来源于人脐带组织。

2) 细胞鉴定:CD105免疫荧光染色为阳性。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5) 细胞生长方式:梭形细胞,不规则细胞,贴壁培养。


三、培养体系及相关试剂

细胞详述脐带是哺乳类的连接胎儿和胎盘的管状结构。脐带中通过尿膜的血管即脐动脉和脐静脉,卵黄囊的血管即脐肠系膜动脉及脐肠系膜静脉。在子宫中,子宫动脉在胎盘的母体部分出的毛细血管,与胎盘的子体部胎儿毛细血管靠近,在此处母体和胎儿的血液间进行CO2和O2,代谢产物即代谢废物和营养物质的交换。脐动脉将胎儿来的废物运送至胎盘,脐静脉将O2和营养物质从胎盘运送给胎儿。

脐带间充质干细胞是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞,它能分化成许多种组织细胞,并且具有取材方便,无伦理学争议等优点,因此越来越受到研究工作者们的关注。


四、产品的运输和保存

视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1) 1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。

2) T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。


五、人脐带间充质干细胞的复苏和培养

方法/步骤

1、水浴锅升温至37℃

2、准备好9mL细胞培养液于15mL无菌离心管中,置于37℃水浴锅预热。

3、将冻存管从液氮中取出,置于转移容器中。

提示:为了使用安全,可将冻存管放置于干冰上转移;或将冻存管拧松1/4圈,释放内部压力后再拧紧。

4、冻存管在37℃水浴锅内不断摇动,至内容物融化。请仔细观察,待冻存管内容物呈半融状态[Sherry1] ,即刻从水浴锅内取出冻存管。

提示:尽量避免水没过冻存管盖;融化的时候越短,对细胞的损伤越小。

5、用75%酒精消毒冻存管口及外壁,擦拭干净。

6、在无菌工作台内打开冻存管,用1mL移液器轻轻吹匀融化的细胞悬液,取20μL细胞悬液用于计数。

7、其余的细胞悬液全部转入步骤⑵预热的15mL离心管中,轻轻混匀。(为了减少损失的细胞数量,可以用1mL完全培养液,冲洗冻存管,再将1mL涤洗液加入离心管)。

8、将离心管拧紧,放入离心机内。离心机设置离心速度为300g,离心10分钟。

9、离心结束后,无菌工作台内打开离心管,用移液器尽量去除上清液,向下层沉淀物中加入1mL预热的完全培养液,轻轻吹匀。

提示:请尽量减少吹打的次数,一般3-4次即可。吹打过程中,避免气泡的产生。

10、将细胞全部接种到1个100mm培养皿或T25细胞培养瓶中,加入足量的完全培养液,轻轻摇晃、混匀,使细胞均匀分布。

11、将细胞培养容器转入5%CO2,37%,饱和湿度的培养箱中培养。

12、通常培养6-8小时,细胞开始贴壁。

13、复苏后的第2天,显微镜下观察细胞,细胞基本全部贴壁。

14、在无菌工作台内,用移液器弃去培养容器内的培养液,更换为新鲜、37℃预热的完全细胞培养液。

15、培养48-72小时后,细胞融合率达80%,可进行消化和传代。


六、注意事项

本产品仅供科研使用,不可应用于临床治疗等其他方面。


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