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三糖铁琼脂培养基(TSI)的应用及检验原理!

2021-04-01作者:百欧博伟浏览次数:233  来源:北京百欧博伟生物技术有限公司

三糖铁琼脂培养基(TSI)的应用及检验原理!


一、背景


三糖铁琼脂培养基TSI)用于鉴别肠道菌发酵蔗糖、乳糖、葡萄糖及产生硫化氢的生化反应。胨和牛肉浸出粉提供氮源、碳源和维生素;乳糖、葡萄糖、蔗糖为可发酵糖类,其产酸时通过酚磺肽指示剂测出,酸性呈黄色,碱性呈红色;硫代硫酸钠可被某些细菌还原为硫化氢,与硫酸亚铁中的铁盐生成黑色硫化铁;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。



二、检验原理


蛋白胨、牛肉浸粉提供氮源、维生素、矿物质;乳糖、葡萄糖、蔗糖为可发酵糖类,其产酸时通过酚红指示剂测出,酸性呈黄色,碱性呈红色;硫代硫酸钠可被某些细菌还原为硫化氢,与硫酸亚铁中的铁盐生成黑色硫化铁;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。


用法:


称取本品64.5g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,加热煮沸1分钟,分装于16mm×150mm试管,121℃高压灭菌15分钟制成高层斜面。


三、应用


用于鸡白痢沙门氏杆菌的分离鉴定及灭活菌苗的研制:


在把从疫源地分离鉴定的鸡白痢沙门氏杆菌强毒株研制成油乳剂灭活菌苗和蜂胶灭活菌苗以预防鸡白痢沙门氏杆菌病。


从白痢的发病鸡只及鸡白痢全血平板凝集呈阳性的淘汰蛋鸡共191只鸡中,检测到80只鸡罹患鸡白痢,在其体内分离到鸡白痢沙门氏杆菌21株,分离株在S·S琼脂平板上呈园形、边缘整齐、稍隆起、表面湿润、光滑、透明的露珠状细小菌落,镜检为革兰氏阴性(G-)、两端钝园、中等大小、散在排列的杆菌,三糖铁琼脂培养基培养上层呈黄色,不利用乳糖、蔗糖,能产生硫化氢,具有赖氨酸脱羧酶和鸟氨酸脱羧酶,发酵糖类时均产生气体,与沙门氏杆菌属0多价(A-F)诊断血清反应发生凝集,与单因子血清01、09、012均呈现凝集,与单因子血清Ha、Hb、Hc、Hd和He均无凝集现象。


证明这21株是鸡白痢沙门氏杆菌,从中筛选出SR96-1、SC14-H、SC18-L3株强毒株,三强毒株攻毒雏鸡,12h后有95%的鸡发病,表现精神萎糜,畏寒,拉稀,粪便呈白色石膏样粘附于肛门周围,32-48h可见死亡,剖解,肝脏严重坏死,肺脏严重出血,盲肠水肿,同时回收到分离株,攻毒二月龄育成鸡和成年鸡6天后剖杀,可见肝表面有针尖大小、数量不一的坏死灶,胆囊肿大,脾肿大,心包膜增厚,心包液增多,心外膜发炎或心肌坏死灶等变化,尤以肝病变为最。


三强毒株和标准株对雏鸡的半数致死量LD50分别是SR96-1LD50=2.04×104个/只;SC14-HLD50=4.43×104个/只;SC18-LLD50=1.38×104个/只;标准株C79-13-4LD50=1.39×104个/只,对2月龄育成鸡、成年鸡的半数感染量ID50分别是1.197×108、1.897×108;鸡白痢沙门氏杆菌标准株每ml含菌量是6.145×109个菌/ml。表明分离菌株的毒力强于或相当于标准株,具有地方代表性,可做菌苗候选株。


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