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人前列腺癌细胞的应用与操作步骤!

2021-03-24作者:百欧博伟浏览次数:233  来源:北京百欧博伟生物技术有限公司

人前列腺癌细胞的应用与操作步骤



一、C4-2B 人前列腺癌细胞的简介


C4-2B,人前列腺癌细胞上皮样细胞呈多角形,尺寸更为规则,贴附在基质上呈散在斑片状生长。


产品名称: C4-2B


中文名称:人前列腺癌细胞


细胞数量:1*10^6


组织来源:前列腺癌;左锁骨上淋巴结转移;男性


细胞种属:人


生长特性:贴壁


细胞污染: HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。


培养基:1640,90%;FBS,10%;双抗。


传代方法:1:2-1:4


培养条件:空气, 95%; CO2, 5%。温度: 37℃


二、C4-2B 人前列腺癌细胞操作步骤


1、细胞传代


如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。(1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。(2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。(3)按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。(4)将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。


2、复苏细胞


将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。


3、细胞冻存


待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例;(1)细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。(2)1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。(3)将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。


4、细胞运输


干冰运输(2ml冻存管)或活细胞运输(T25细胞瓶)

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