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液相色谱仪试验方法论证方案及其中出现的问题分析论

2020-03-19作者:浏览次数:190
一、液相色谱仪试验方法论证标准
HPLC办法树立后,通常需停止论证。办法全面论证包括专属性、线性、精确性、精细度、回收率、灵活度等诸多内容,表1给出了满足精细精确、稳定牢靠并可移植转让的严厉HPLC规范办法的论证计划。普通情況下,针对不同的剖析目的,可能只需求一次胜利的别离或能快速、“粗略”地回答某一特定问题,则只需求对其中的几项加以调查。经过办法论证可能找出可能因仪器和操作者的不同而招致的潜在问题。
严厉HPLC规范办法的论证计划
序号 论证计划
1 应准备数据标明所需办法的性能
2 应有为其他操作者运用的书面剖析步骤
3 以一个以上的系统或操作者,用包括希冀组分和希冀被测物浓度的样品系统地论证办法的性能,比拟不同时间和不同实验室之间的实验数据
4 应得到色谱柱的希冀寿命以及柱间重现性的数据

5 研讨不正常的结果,以纠正潜在的问题

二、办法论证中的问题
随着办法树立的停止,可能会呈现各种问题,表2中列出其中的一些问题及可能的缘由。其他问题还包括:
①开端时色谱图中有的谱峰可能比所希冀的要宽(塔板数低),或谱峰严重拖尾;
②在办法应用中还会发现用同一(或不同)厂家的“规格相同”色谱柱替代原柱后,别离状况会变得难以承受;
③常规实验室无法用(规格相同的)另柱反复办法;色谱柱寿命短(如进样缺乏100次即不能再用);
④(同一色谱柱)反复进样的色谱图不一样,定量精度较差;
⑤保存时间从一系列运转的开端直至完毕不断漂移;
⑥在后面样品的色谱图中可能呈现其他峰干扰被测物测定。

序号 问题 评论


1 塔板数低 色谱柱选择不对,二次保存、峰形不好的影响
2 色谱柱易变性 色谱柱选择不对,二次保存的影响
3 色谱柱寿命短 色谱柱选择不对,样品需预处置
4 保存值变化 色谱柱均衡不够,样品需预处置,键合相流失
5 定量精度差 需更好地校正,找出误差的来源
6 呈现新的干扰峰 初始别离不够或初始样品无代表性
将长期运用的常规办法,最好先对这些问题停止预测并加以改善,办法重现性差会直接影响质量控制或消费实验室的工作。好的办法能够容忍实验条件的微小变化,普通色谱工作者容易控制、便于移植。可经过一定的实验设计,研讨不同条件对别离的影响。
三、液相色谱仪试验设备精确度、精细度和线性范围
HPLC定量技术的办法论证请求给出办法的精确度、精细度和线性范围。精确度定义为丈量值与真实值接近的水平,真实值可经过各种办法来肯定,精确度值通常用相对误差表示:
式中,Er为相对误差;xi为丈量值;μ为真实值。
精细度是指同一样品屡次丈量结果的反复水平,包括运用不同的仪器、样品制备、实验室以及不同的操作人员等在一天或经过数天所得到结果之间的重现性,通常用
线性范围是指响应值与样品浓度的校正曲线近似成直线关系的范围,即数据满足线性方程的水平,每一种被剖析物在较宽的浓度检测范围有良好的线性响应是定量剖析办法的关键。响应值与样品浓度之间的线性关系能够表示为:
(3)y为液相色谱仪检测器的响应值;x为样品组分的浓度;m为直线的斜率;b为直线的截距。理想状况下,b≈0,即响应值与浓度呈正比例关系,这种状况下丈量更精细且计算容易,同时可用较少的规范样品数据肯定方程中的系数。
关于稀溶液样品,UV检测器的响应值与溶质浓度间的关系契合Beer定律,即正比例关系。线性校正也能够阐明系统在所研讨的浓度范围内运转良好。此外,线性办法(b≈0)能够用一个(最好为两个)点提供快速便当地检验校正的精确度。假设新校正结果较原有值有大于2σ的偏向则请求重新校正。b≠0的线性响应或者非线性响应对某些办法可能更适宜,但数据处置过程将较为复杂。
最大定量限通常由检测器的线性范围决议(即检测器随溶质浓度的增加不再呈线性响应)。最大和最小定量限决议了办法应用的浓度或质量范围。假设需求更高浓度样品的定量剖析,将样品稀释至可检测的范围内是有效扩展检测范围的一种烦琐、有效的手腕。
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