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高灵敏ELISA试剂盒操作步骤中的忌讳
2018-01-30作者:浏览次数:4  来源:上海哈灵生物试剂检测中心
 ELISA试剂盒实验中每一个步骤都尤为重要,细节不容忽视,它是实验成功的关键与否;在这

里本司为方便各位了解,更好的完成实验,特对高灵敏ELISA试剂盒操作步骤中的忌讳做出以

下分析,供大家参考:

1、吸取液体时速度不易太快,以免产生气泡,吸取的量不够准确。

2、手工洗板时每次加入洗涤液后。应静置15~30s,不要将一个酶标孑L中的洗涤液溅入另一

酶标孔中,防止交叉污染。甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干。

3、底物为TMB,避免与皮肤相接触。终止液为2tool的浓硫酸具有腐蚀性,应尽量避免接触皮

肤。

4、加样后及时放人孵箱,标本较多时,要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间,防止孵育

时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。

5、作时必须戴手套,穿工作衣,严格健全和执行消毒隔离制度。

6、剩余样品及废弃物应经121℃高压蒸汽灭菌30分钟,或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分

钟后废弃。

7、同批号试剂组分不得混用。

8、洗涤时各孔均需加满液体,防止孔口有游离酶不能洗净。

9、每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是最后加底物溶液及2N H2SO4。

测量时先用此孔调OD值至零。

10、要确保微量加样器的准确性,可以使用蒸馏水和电子天平进行确定(由于蒸馏水不含杂质

,温度环境为20%左右时,lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加样

器都应该将其最高量程和最低量程进行确定。

11、在使用微量加样器时,吸取不同瓶子中液体后要更换枪头,即使吸取标准品溶液。

12、检验技师应具备从事实验室操作的基本素质和实践经验。能熟练操作实验仪器、器械,具

有一定总结和分析问题的能力,对实验中出现的意外情况能及时妥善解决。

13、操作前仔细阅读说明书,严格按照说明书要求进行规范化操作。不同批号的试剂不可混用

。值得改进的地方,反复试验确定成立后才能改进,比如洗板次数的掌握等。

14、评估试剂的实用性,试剂的稳定与否,对准确率的高低到头重要。在试剂启用前,应进行

阴、阳对照及样品反复比照试验,判定试剂符合要求后方可使用。

15、加样要准确、快速。加样不准确,酶生成物的量不能确定,直接影响显色结果。另外,显

色的深浅及A值的测定与加入显色剂和终止液的量有关,所以加样应慎重。要求在一定时间内加

样完毕的实验,如果加样迟缓,便出现误差,而且试剂长时间暴露在外,尤其室温过高时,保

存期会缩短甚至失效。

16、使用校对过的微量移液器,排除自然误差。移液器准确与否对定量检测尤为重要

17、严格掌握显色时间,显色时间过短,加入终止液反应终止后,底物结合物的量过少,易出

现假阴性。超过显色要求时间后显色,应判为假阳性,这可能与试剂本身有关。加显色剂后立

即显色,不可报阳性,这可能是本底显色的结果。

18、洗涤彻底,洗板不彻底,酶结合物本底显色会呈现假阳性。另外,洗涤液要新鲜,现用现

配,陈旧的洗涤液会出现本底增高现象,也可能出现假阳性。

19、严控反应时间,反应时间过长,酶失活;反应时间过短,酶结合物不能与血清中的微生物

抗原抗体充分结合,生成物结构松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假阴性。

20、ELISA检测操作步骤复杂,可强各环节的质量控制,才能得到准确可靠的检测结果。

愿以上这些能对您有所帮助,如果您还有什么疑问,欢迎来电我司咨询。

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