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微生物菌种实验操作中常见故障归纳
2019-09-16作者:浏览次数:16
一、无菌操作规定

1. 打疫苗病菌时务必穿工作服装、戴工作帽。

2. 开展打疫苗食品类试品时,务必穿专用型的工作服装、帽及凉拖,应放到无菌车间缓存间, 工作中前经紫外线消毒后应用。

3. 打疫苗食品类试品时,应在进无菌车间前要香皂冼手,随后用75%乙醇药棉将手擦整洁。

4. 开展打疫苗常用的塑料吸管,培养皿及培养液等务必经消毒杀菌杀菌,开启包裝未应用完的容器,不可以置放后再应用,金属材料用品应髙压杀菌或用95%乙醇引燃灼烧多次后应用。

5. 从包裝中取下塑料吸管时,塑料吸管尖部不可以碰触露出位置,应用塑料吸管打疫苗于试管婴儿或培养皿时,塑料吸管尖不可碰触试管婴儿或培养皿边。

6. 打疫苗试品、转种病菌务必在酒精喷灯前实际操作,打疫苗病菌或试品时,塑料吸管从包裝中取 出后及开启试管婴儿塞必须根据火苗消毒杀菌。

7. 接种环和针在打疫苗病菌前要经火苗灼烧所有铁丝,必需时也要烧到环和针与杆 的相接处,打疫苗结核菌和烈性菌的接种环应在开水中烧开5min,再经火苗灼烧。

8. 塑料吸管汲取菌液或试品时,运用相对的橡皮擦头汲取,不可立即用口吸。

二、无菌检测间应用规定

1、无菌检测间通往外边的窗子应是双层中空玻璃,然后密封性,不可随便开启,并下设与无菌检测 间尺寸相对的缓存间及移门,另下设0.5-0.7平米的小窗,以便进到无菌检测间后传送物件。

2、无菌检测间内要清洁,工作中完用2%-3%煤酚皂水溶液消毒杀菌,擦洗设备工作台,不可储放与试验不相干的物件。

3、无菌检测间应用前后左右应候门关严, 开启紫外灯,如选用房间内悬吊训练紫外灯消毒杀菌时,需30W紫外灯,间距在1.0m处,直射時间许多于30min,应用紫外灯,应留意不可立即在紫外光下实际操作,以防造成损害,led灯管每过半个月要用乙醇药棉轻轻地擦洗,去除上边尘土和油污,以降低紫外光透过的危害。

4、解决和打疫苗食品类标本采集时,进到无菌检测间实际操作,不可随便进出,如必须传送物件,可根据小窗传送。

5、在无菌检测间内如必须装空调时,则需有过滤系统。

三、消毒灭菌规定
微生物检测用的玻璃容器、金属材料用品及培养液、被环境污染和打疫苗的塑造物等,务必经灭菌侧后方能应用。
(一)空气干燥和寒湿髙压蒸汽锅灭菌方法
1、灭菌前提前准备
(1)全部必须灭菌的物件最先应清理晾晒,玻璃容器如塑料吸管、培养皿用包装纸盒严实,如 用金属材料筒应将上边通气口开启。
(2)装培养液的三角形瓶盖,用纸包装好,试管婴儿盖好盖,针管须将管芯抽出来,用沙布包 好。
2、装放
(1)干热灭菌器:装放物件不能过挤,且不可以触碰箱的一壁。
(2)大中型髙压蒸汽锅::置放灭菌物件各自捆扎好,立即放进消毒筒内,物件中间不可以 过挤。
3、机器设备查验
(1)密封门的电源开关是不是灵便,橡皮圈有没有毁坏,是不是整平。
(2)查验气压表蒸汽排尽时是不是滞留在回零,关紧门和盖,通蒸汽或加温后,观查是式压力锅或立柱式工作压力蒸汽灭菌器的应用应按以下流程开展:
①手提压力锅在行为主体内添加3L冷水,立柱式压力锅放水16L(多次重复使用时要将水 量补充,水变浑浊需拆换).
②手提压力锅将机盖上的排汽管插进消毒桶内腔的方钢管中(无塑料软管或塑料软管生锈裂开的灭菌器不可应用)。
③盖好机盖扭紧,勿使漏汽;置灭菌器于火灾上加温,立柱式压力锅通上开关电源,并开启机盖上的自动排气阀放了冷气机(水烧开后排气管10-15min)。
④关掉自动排气阀,使蒸气压升高到要求规定,并保持要求時间(按灭菌物件特性与相关状况而定)。
⑤超过要求時间后,对需干躁的物件,马上开启自动排气阀排出来蒸汽,待工作压力修复到临时,大自然水冷却至 60℃后打开表盖取放,若为液體物件,不必开启自动排气阀,而应先将锅除去热原,待大自然水冷却,工作压力修复至零,溫度降至60℃下列再打开表盖取放,防止忽然缓解压力液體强烈烧开或器皿工程爆破。(3)立式压力锅蒸汽灭菌器的应用按以下流程开展:
①关严锅门,开启旁通阀,将蒸汽导入隔层开展加热,隔层内强冷空气经阻气器全自动排出来。② 隔层超过预订溫度后,开启锅室旁通阀,将蒸汽导入锅室,锅房间内强冷空气经锅室阻气器全自动排出来。
③待锅室超过要求的工作压力与溫度时,调整旁通阀,使维持匀速运动。
④大自然或人工服务减温至60℃再开关门取放,不可应用迅速排出来蒸汽法,防止忽然降血压,液體强烈烧开或器皿工程爆破。
⑤应用全自动系统控制式工作压力蒸汽灭菌器,在摆好物件关严门后,应依据物件类型按 动相对电源开关,便于按规定程序流程全自动开展灭菌,灭菌时务必运用附属仪表盘纪录溫度与時间以备查簿,实际操作规定应严格执行生产厂家使用说明开展。
5、灭菌溫度与時间
(1)干热灭菌器灭菌溫度160℃,1.5-2h。
(2)工作压力蒸汽灭菌 锅灭菌溫度与時间。
(二)间歇性灭菌方法
1、灭菌方法系运用不加压力的蒸汽灭菌,一些化学物质经髙压蒸汽灭菌非常容易毁坏,能用此法灭菌。
(1)将欲灭菌物件放置锅内,盖上机盖,开启出水口,使器内余水放尽。
(2)关掉出水口,开启进气门,依据必须消毒10~20min。(3)灭菌结束关掉进气门,取下物件待冷至室内温度溫度,放进37℃温箱留宿,隔日仍按所述方式消毒,这般多次,就能超过灭菌目地。
2、血细胞凝结器使用说明,培养液中带有血细胞或生鸡蛋独特成分时,因高烧会毁坏其营 培养份,故用超低温,可让血细胞凝结,又可超过灭菌目地。
(1)在应用该法灭菌的血细胞等预包装时,需严格执行无菌操作,试管婴儿、培养皿也经灭菌后应用。
(2)将培养液按规定使成斜坡或高层住宅,加满水后,接好开关电源,提温75~90℃1h灭菌,放37℃温箱留宿,再这般灭菌多次。
3、烧开消毒:能用煮锅或烧开消毒机,水烧开后再煮5~15 min,也可在水里添加2%石炭酸烧开5 min,添加0.02%室内甲醛,80℃煮60 min均可超过灭菌目地, 但采用 烧开消毒的增消剂时, 应留意对物件的腐蚀。
4、灭菌解决:灭菌后物件,按一切正常状况已属无菌检测,从灭菌器中取下应认真仔细置放,以防再一次环境污染。(1)物件取下,随后查验包裝的一致性,若有毁坏或棉塞脱下,不能做为无菌检测物件应用。(2)取下的物件,若为包裝有显著的水侵者,不能做为无菌检测物件应用。
(3)培养液或实验试剂等,应查验是不是合乎超过灭菌后的颜色或情况,未超过者应废料。
(4)开闭式器皿,在取下时要将圆孔筛关掉。
(5)取下的物件坠落在地或误放不干净的这栋,或粘有水液,均视作遭受环境污染,不能做为无 菌物件应用。
(6)取下的及格灭菌物件,应储放于储物间或防污柜里,禁止与未灭菌物件混存。
(7)凡属及格物件,应标着灭菌时间及有效期。
(8)每次灭菌解决进行后,纪录灭菌产品名、总数、溫度、時间、作业者。


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