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流式细胞仪有哪些基本用途
2019-09-10作者:浏览次数:10
流式细胞仪(flow cytometry,FCM)是集激光设备、电子信息技术、光学精确测量技术性、电子信息技术及其体细胞莹光技术性、单克隆抗体技术性为一体化的新式新科技仪器设备,具备敏感度高、可重复性好、非特异强、方式灵便、剖析更快等优势。

一、流式细胞仪的基础主要用途
流式细胞仪能够一起检验单独体细胞的多种多样体细胞主要参数。
1.內部主要参数:前向角光光学散射(FSC)显示信息体细胞的尺寸,侧面角光光学散射(SSC)显示信息细胞质的颗粒物性。从內部主要参数可掌握体细胞的尺寸、形状、细胞质的颗粒物性、黑色素含水量等。
2.外界主要参数:对体细胞的某个被测成份开展非特异莹光标识后开展检验,包含DNA成份及含水量、RNA含水量、体细胞表层和体细胞内的各种各样抗原、体细胞作用特异性检验等,剖析范畴很广且非特异强。流式细胞仪能以每秒十余、百余、数千个体细胞的速度开展检验,测量的体细胞数量达到千余、数十万,促使样版能在较短期内内获得全方位和精确結果。

二、样版的收集和单细胞悬浮液制取的质量管理
用以流式细胞剖析的样版须是单细胞悬浮液。
1.血夜、脊髓是纯天然的单细胞悬浮液,可立即染色剂剖析。标本采集用肝素抗凝,需要6钟头内开展抗原校准染色剂,時间太长,体细胞特异性减少,危害剖析結果,48钟头后的标本采集无剖析实际意义。一些实验以某一大群体细胞为检验另一半,须将测定体细胞成份提取。东大整形常见淋巴细胞分离出来液分离出来淋巴细胞,做成单细胞悬浮液。
2.实体线机构标本采集单细胞悬浮液的制取:取手术治疗摘除的新鮮机构的异常一部分用骨科镊取放一块块机构置钢在网上轻轻地擦磨,一起用PBS缓冲液清洗,搜集清洗下的单细胞悬浮液,调体细胞浓度值至lxl06/ml,经150目涤纶膜过滤、抽滤,取沉淀加70%酒精固定不动预留。应留意在钢在网上擦磨的全过程中,用劲要适度,用劲过大,对体细胞损害很大,造成很多体细胞残片,危害剖析。

三、单细胞悬浮液莹光染色剂的质量管理
莹光染色剂对流式细胞剖析关联重特大,我科应用的荧光染料有:PE、FTTC、cychrome、PI等,实际操作时将标本采集和着色剂加微信好友试管婴儿底端,搅拌,遮光(明亮可导致莹光淬灭),室内温度置放20分鐘,如室内温度过低危害染剂融合,可适度增加染色剂時间。血夜、脊髓标本采集染色剂后经溶血、清洗、固定不动全过程就能上机操作。应留意标本采集和实验试剂使用量非常少,不可加进试管婴儿内壁,避免标本采集和实验试剂不可以充足触碰上色。溶血必须要充足,沒有彻底融解的血细胞及残片的存有危害检验剖析。
四、上机操作检验剖析的质量管理
上机操作获得前应用BD企业出示的质量控制脂质体(calibrate bends)来设定和调整仪器设备的各种各样主要参数于最好情况,如设定光电倍增管(PMT)工作电压,调整莹光赔偿,检验探测仪的敏感度,使仪器设备的变异系数(CV值)在2%之内。


注:有需要流式细胞仪的可以在仪器设备网查找

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