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糖基化剖析的必要性及统计分析方法
2019-09-04作者:浏览次数:29
糖基化剖析的必要性及统计分析方法

目前的分析方法

糖链常用的分析方法有:液相色谱法、毛细管电泳法和高效阴离子交换色谱法。但无论是液相色谱法还是毛细管电泳法,都必须使用专用试剂进行荧光衍生。此衍生耗时长(4小时)且会导致唾液酸丢失,不能准确分析含唾液酸样品。且也无法分析磷酸化糖及硫酸化糖。而离子色谱无需衍生,定量准确,可以覆盖分析所有糖类型

对于单抗药物的复杂糖基化,离子色谱可以从三个方面给予解析:

1.糖链水准的剖析——N糖图普测量
N—糖基化体现的糖链能够根据肽甘酶F或肽甘酶A酶切功效,或是肼解功效从糖蛋白上释放出。糖链经清洁后可立即进样,不用衍化,防止了衍化化全过程中唾液酸化聚糖的构造更改。



2.单糖构成测量


单抗糖链关键由葡萄糖胺、半乳糖胺、岩藻糖、果糖、半乳糖、甘露糖、唾液酸等单糖构成。单糖构成测量能够从基本水准上对单抗的糖构成差别得出分析。

3.唾液酸的测量

唾液酸存有于单抗的糖链尾端,针对单抗在植物体内作用的充分发挥起着非常关键的功效,危害药品的实效性。唾液酸的差别,是人源抗原和别的微生物抗原差别的1个指标值。唾液酸的释放出来,可应用柔和酸水解反应或酶解。应用离子色谱剖析矿酸的唾液酸试品,可立即进样,不用衍化。不一样构造的唾液酸在CarboPac PA10色谱柱上能够获得迅速高效率的分离出来。



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